產(chǎn)碳青霉烯酶的操作法則
產(chǎn)碳青霉烯酶作為細(xì)菌(尤其是革蘭陰性桿菌)主要耐藥機(jī)制,自1982年英國(guó)從粘質(zhì)沙雷菌中分離出碳青霉烯酶以來(lái),已陸續(xù)報(bào)道70余種碳青霉烯酶。由于產(chǎn)酶編碼基因位于染色體或質(zhì)粒上,可以快速整合至細(xì)菌中,特別是臨床分離的銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥率不斷增高,給臨床治療和醫(yī)院感染防控帶來(lái)巨大的挑戰(zhàn)。
產(chǎn)碳青霉烯酶具有很廣泛的水解底物譜,臨床一旦遇到產(chǎn)該酶的菌株,很難治療,目前尚無(wú)有效藥物。進(jìn)行聯(lián)合藥敏試驗(yàn),或進(jìn)行聯(lián)合抗菌藥治療。目前已報(bào)道的可檢測(cè)產(chǎn)碳青霉烯酶的方法主要有EDTA協(xié)同試驗(yàn)、改良Hode試驗(yàn)、三維試驗(yàn)(以亞胺培南替代頭孢西丁,其余操作相同)以及Etest法。
操作:
1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基:取瓶?jī)?nèi)干粉42.5g溶于1000mL去離子水的潔凈三角瓶中,移取2.0ml增補(bǔ)劑S1加入到培養(yǎng)基內(nèi),充分?jǐn)嚢杌靹?。也可根?jù)需要按照42.5g/L和2.0ml/L的比例擴(kuò)大或縮小制備培養(yǎng)基的量。
2、加熱至100℃,不停攪拌,使其*溶解。若使用微波爐加熱,應(yīng)將培養(yǎng)基加熱沸騰,立即移出,輕輕搖勻,再放入微波爐加熱,觀察小氣泡變?yōu)榇髿馀荩敝?溶解即可。切勿使培養(yǎng)基溢出。
3、增補(bǔ)劑S2:取增補(bǔ)劑S20.25g溶于2.0ml無(wú)菌去離子水中,攪拌均勻,過(guò)濾(0.45um濾膜)備用。也可根據(jù)需要按照0.25g/L的比例擴(kuò)大或縮小制備增補(bǔ)劑的量。
4、將溶解*的增補(bǔ)劑S2加入到冷卻至45℃~50℃的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和增補(bǔ)劑S1中,輕輕地?fù)u動(dòng)均勻,配制成產(chǎn)碳青霉烯酶的顯色培養(yǎng)基,傾注平皿,使其凝固,晾干備用。
保存該成品平板在室溫可保存一天或在冰箱內(nèi)貯存1個(gè)月(2℃~8℃,避光)。